Que hace la Western Blot?
¿Qué hace la Western Blot?
El Western Blot es una técnica que permite reconocer anticuerpos por antígenos que se absorben en una membrana. Estos antígenos son previamente separados en geles de poliacrilamida-dodecil sulfato de sodio y luego transferidos a papel de nitrocelulosa.
¿Qué se necesita para un Western Blot?
Materiales
- Gel con proteínas cargadas y separadas previamente (ver abajo)
- Camara de transferencia semiseca para Western blot.
- Papeles whatman No1 o 2 del tamaño del gel. NOTA: 6 papeles whatman por cada gel.
- Recipientes del tamaño del gel.
- Membrana de PVDF o nitrocelulosa.
- Bisturi o tijera.
- Fuente de poder.
¿Qué es un control de carga en Western Blot?
Los controles de carga tienen una segunda función como control en técnicas western blot. Pueden utilizarse para comprobar si se ha producido una transferencia uniforme del gel a la membrana en todo el gel. Esto es imperativo cuando se hacen comparaciones de los niveles de expresión de proteínas entre muestras.
¿Cuándo usar Western blot?
1. – ¿Cuándo hacer un Western Blot?
- Cuando se cuenta con un reducido número de muestras.
- Cuando se quiere determinar el peso molecular de la proteína.
- Cuando se quieren observar cambios en el peso molecular debidos a modificaciones postraduccionales.
¿Cómo se interpreta una prueba de Western Blot?
El resultado de la prueba de Western blot se informa como negativo cuando hay ausencia total de bandas; como indeterminado, cuando no cumple los criterios definidos en la tabla 1 y no es egativo, y positivo cuando cumple los criterios, de acuerdo con el que se haya adoptado.
¿Qué es un buffer de transferencia?
La transferencia de proteínas o ácidos nucléicos a una membrana inmovilizante, es referida como “blotting”, la transferencia puede ser realizada por difusión molecular, por un flujo de buffer inducido por la succión (microfiltración) o acción capilar, el método utilizado de manera más frecuente es la …
¿Qué es la prueba confirmatoria?
El análisis de seguimiento también se conoce como prueba confirmatoria. Generalmente se realiza cuando la prueba de detección tiene un resultado positivo. Múltiples tipos de exámenes se pueden utilizar para: Detectar el virus.
