Que sucede en cada ciclo de PCR?
¿Qué sucede en cada ciclo de PCR?
La PCR común se realiza con ciclos que tienen tres pasos de temperatura. Estos incluyen la enzima usada para la síntesis de ADN, la concentración de iones divalentes y de los dNTP en la reacción, y la temperatura de unión de los cebadores, así como la longitud del ADN que se desea amplificar.
¿Cuáles son los inhibidores de la PCR?
Los inhibidores de la PCR son contaminantes orgánicos e inorgánicos incluidos en la muestra de ADN que interfieren atenuando o inhibiendo completamente la reacción de amplificación por PCR.
¿Cómo actúan los inhibidores en el PCR?
Los inhibidores de la PCR interfieren en el proceso de amplificación del DNA, actuando a diferentes niveles, ya sea mediante la degradación o enlace de ácidos nucleicos o a la interacción con iones Mg2+, impidiendo por tanto su unión con cualquier DNA polimerasa (Peist et al., 2001).
¿Qué es control interno en PCR?
El control interno (CI) de amplificación es un sistema para la detección de los falsos negativos. Se basa en la detección paralela de un fragmento diferente al del patógeno, independientemente de la presencia o no del patógeno en la muestra y por tanto siempre debe detectarse.
¿Qué es el efecto plateau en PCR?
El efecto Plateau es una limitación intrínseca de la PCR. Amplificar por encima del mismo lleva a la formación de productos inespecíficos y a la pérdida de fragmentos deseados por la actividad exonucleasa de la polimerasas.
¿Cómo influye la temperatura de alineamiento en la reaccion de PCR?
Una vez separadas las cadenas del ADN, se alinean los iniciadores a sitios específicos complementarios de las cadenas sencillas de la región que se va a amplificar, para que esto suceda se baja la temperatura entre 40 y 60 °C lo que permite la unión (alineamiento) de los iniciadores.
¿Qué significa pb en PCR?
PB = número de pares de bases. la cual es una molécula cargada positivamente que, mientras esté en solución sin unirse al ADN de doble cadena, prácticamente no emite fluorescencia; sin embargo, cuando se une al surco menor del ADN in- crementa hasta 1,000 veces su fluorescencia (Figura 4).